FACS分析检测跨膜型肿瘤坏死因子(TNF)

 

    1．材料 

    ①含2％人血清，0．1％叠氮钠的PBS；

    ②FITC标记的TNF单克隆抗体；

    ③羊或兔抗TNF多克隆抗体及F1TC标记的羊抗兔IzC。

 

    2．操作步骤

    (1)单核细胞加或不加激活剂，37℃培养一定时间。

    (2)2000rpm离心10min，弃上清。

    (3)用含2％人血清／0．1％叠氮钠的PBS悬浮细胞。

    (4)将105细胞厅L0口人圆底96孔培养板，并加FITC标记的TNF单抗冰上放置20min。如无FITC标记的TNF单抗，可按(5)～(7)步骤操作。

    (5)加1：500稀释的兔抗TNF多抗，冰上放置20min。

    (6)用PBS洗一次，以去除未结合的抗体。

    (7)再加1：500稀释的FITC标记的羊抗兔ISC，置冰上20min。

    (8)PBS洗4次后，用流式细胞仪分析荧光标记阳性细胞百分率及平均荧光强度。