ELISA法检测白细胞介素-4

    [检测方法]  ELISA法

    [方法学原理]  在微孔反应板上包被抗人IL-4单克隆抗体，待测标本和标准品中的IL-4会与抗人IL-4单克隆抗体结合，游离的成分被洗去，同时加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素与亲和素特异结合，抗人IL-4抗体与结合在单克隆抗体上的人IL-4结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色剂，若反应孑L中有IL-4，HRP会使五色的显色剂呈现蓝色，加终止液变黄色。在波长450nm处测吸光度，IL-4浓度与吸光度成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的IL-4浓度。

    [标本准备]  静脉血2ml，不抗凝。

    [试剂]

    1．预包被微孔反应板

    2．浓缩酶结合物

    3．酶结合物稀释液

    4．标准晶和标本稀释液

    5．浓缩生物素化抗体

    6．IL-4标准品

    7．浓缩洗涤液

    8．显色剂A、B

    9．终止液

    [仪器]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。   

    [检测步骤]

    1．在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品100ul，再加生物素化抗体．工作液50ul。

    2．振荡混匀，置20～25℃环境中温育120min。

    3．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。

    4．除空白孔外，加入酶结合物工作液100ul。

    5．振荡混匀，置20～25℃环境中温育30min。

    6．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。

    7．每孔加入显色剂A、B各50fA，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色10min。

    8．加入终止液50tA后，轻轻振荡混匀。用酶标仪(450nm波长)测定各孔吸光度，与标准曲线对照，求出IL-4水平。

    [正常参考值]  务实验室可根据检测方法的不同确立正常参考值范围。

    [注意事项]

    1．试剂盒从冷藏环境中取出时应在室温环境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存。

    2．酶标板洗涤时各孔均需加满洗涤液，防止孔内有游离酶不能洗净。应设定30—60s的洗涤浸泡时间。

    3．滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确(注意：勿将试剂滴在孔壁上)。

    4．所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2mol／L硫酸，使用时应注意安全。

    5．每批样本应同时做标准曲线。

    6．若标本OD值在标准曲线测定范围以外，应适当稀释后重测。

    [临床意义]  IL-4能促使静止的B细胞表达MHC亚类分子，增强淋巴细胞的抗原呈递能力，增强巨噬细胞的吞噬功能，而且对淋巴细胞的迁移也具有一定意义。