β-半乳糖苷酶试验

β-半乳糖苷酶试验

液体法（ONPG法）

成分

邻硝基苯β-D-半乳糖苷(ONPG) 60.0 mg

0.01mol/L 磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10.0 mL

1%蛋白胨水(pH7.5) 30.0 mL

制法

将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm 试管内，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。

试验方法

自琼脂斜面挑取培养物一满环接种，于36 °C1 °C培养1 h~3 h和24 h观察结果。如果β-D-半乳糖苷酶产生，则于1 h~3 h变黄色，如无此酶则24 h不变色。

平板法（X-Gal法）

成分

蛋白胨 20.0 g

氯化钠 3.0 g

5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal) 200.0 mg

琼脂 15.0 g

蒸馏水 1 000.0 mL

pH 7.20.1

制法

将上述各成分加热煮沸于1L水中，冷却至25 ℃左右校正pH至7.20.1，115 °C 高压灭菌10 min。倾注平板避光冷藏备用。

试验方法

挑取琼脂斜面培养物接种于平板，划线和点种均可，于36 °C1 °C培养18h~24 h观察结果。如果β-D-半乳糖苷酶产生，则平板上培养物颜色变蓝色，如无此酶则培养物为无色或不透明色，培养48 h~72 h后有部分转为淡粉红色。